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    細胞培養(yǎng)服務為你帶來細胞培養(yǎng)具體步驟和要求

    發(fā)布時間： 2022-05-30　　點擊次數(shù)： 1375次
     
    　　細胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)服務是伊萊博生物的基礎服務項目之一。
    　　培養(yǎng)多種細胞并能在細胞內(nèi)穩(wěn)定或瞬時轉(zhuǎn)染特定的受體或蛋白，耐藥細胞株的構(gòu)建。生長抑制及細胞毒實驗細胞信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)的生物化學研究：可提供包括G蛋白、cAMP、DAG、CREB、鈣離子、MAPK傳導通路等多種信號分子在內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導研究技術支持。凋亡測定(caspases,annexinVandDNAfragmentation，線粒體膜電位的測定),細胞凋亡及周期測定（流式細胞術）與細胞侵襲轉(zhuǎn)移相關的實驗：黏附、轉(zhuǎn)移和侵襲與細胞分化相關的實驗細胞衰老實驗
    　　細胞培養(yǎng)服務的細胞培養(yǎng)具體步驟和要求以及注意事項：
    　　一、復蘇
    　　1、把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
    　　2、把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
    　　3、把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
    　　4、標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
    　　5、3天換一次培養(yǎng)基。
    　　二、傳代
    　　1、培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
    　　2、把原有培養(yǎng)基吸掉。
    　　3、加適當?shù)囊鹊癰酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鐘。
    　　4、細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
    　　5、用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
    　　6、把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
    　　7、倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。
    　　8、根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
    　　三、凍存
    　　把細胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
    　　凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。