TTC染色

TTC染色原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復(fù)合物，它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色，而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降，不能反應(yīng)，故不會產(chǎn)生變化呈蒼白。

新鮮組織切片制備及染色實(shí)驗(yàn)步驟：
1、取材：動物麻醉后立即取新鮮組織(如腦、心臟) ，不經(jīng)固定液固定，將組織直接放入-200速凍20-30min，如果不急用,可以暫時(shí)放置-80°C凍存。
2、組織塊切片：將凍好的組織稍解凍，用萊卡刀片手動切片，厚度2-3mm為宜，切面整齊。
3、TTC染色：將切片放入提前預(yù)熱好的的TTC孵育液中，放入37C水浴鍋中避光孵育15-30min，間隔5-8min輕輕搖動組織，使其均勻接觸到染色液,并觀察染色結(jié)果。
4、拍照：組織成色后，加入固定液終止反應(yīng)，并避光保存組織， 照相機(jī)拍照。

TTC染色判讀：
組織正常區(qū)呈紅色，梗死區(qū)呈蒼白色。

注意事項(xiàng)：
1、標(biāo)本越新鮮越好，勿固定，刀片宜薄而鋒利， 在冰箱中速東的時(shí)間以能順利切片為宜，保持切片平整。
2、染色后的標(biāo)本浸存于國定液中避光保存，染色結(jié)果能保存數(shù)月 ，在陽光下易褪色；
3、TTC染色波避光4°C可保存一個月，使用前先復(fù)常溫。